滅菌方法簡介

 

培養基在使用之前必須進行滅菌處理,將其所含活菌全部殺死或全部除去。常用的滅菌方法有過濾除菌、干熱滅菌、濕熱滅菌及輻照滅菌等。其中,濕熱滅菌法又包括四種方式:煮沸法、流動蒸汽滅菌法、間歇滅菌法和壓力蒸汽滅菌法。通常來說,使用比較多的是壓力蒸汽滅菌法。

 

但是對于有些培養基來說,高壓條件會損壞培養基中的某些成分,不利于培養基的使用,所以只能采用煮沸滅菌的處理方法。本文主要就煮沸滅菌方法進行討論。


煮沸滅菌的常見表述

 

有關煮沸滅菌的描述,通常有如下幾種方式:

a、稱取本品41. 5g,加熱溶解于1000mL蒸餾水中,煮沸不要超過2分鐘。無需高壓滅菌。臨用時制備,不得超過3小時。

 

b、稱取本品50. 3g,加入1000mL蒸餾水中,加熱煮沸至完全溶解,冷至45-50℃, 搖勻,傾入無菌平皿備用。無需高壓滅菌。

 

c、稱取本品89g,煮沸溶解于1000mL蒸餾水中,冷至45-50℃時,傾入無菌平皿,備用。注:無需高壓滅菌。

 

d、稱取本品57g,加熱攪拌溶解于1000mL蒸餾水中,不要過分加熱,冷至50-55℃時,傾入無菌平皿,部分開蓋干燥2h,然后蓋上,備用。無需高壓滅菌。在24小時內使用。 

這些方法描述中,都特別強調“無需高壓滅菌”、“不要過分熱”、“煮沸充分溶解”,那么究竟該怎樣操作,才能達到既滅菌完全又盡量降低對培養基的破壞呢?

 


煮沸滅菌的實際操作

1、關于煮沸方式,有人提出可以隔水煮沸,但經過反復試驗,發現這種煮沸方式存在兩大弊端:①溫度不夠,達不到滅菌效果;②經隔水煮沸的含瓊脂培養基,在水浴的過程中易出現分層現象。

2、為了對培養基進行有效煮沸滅菌,根據我們實踐摸索,建議如下操作:

①準備好電磁爐和搪瓷缸(不要用鐵質容器) ;

②將培養基按比例加水,稱量至搪瓷缸中,用玻璃棒不斷攪拌,直至完全溶解、無明顯團狀物或顆粒;

③將搪瓷缸置于電磁爐上,大火燒開,期間持續攪拌,避免糊底;當液面完全沸騰后,立即將搪瓷缸從電磁爐上拿開,算是一次煮沸操作;液面回落后,立即放回電磁爐,重復上面的步驟;總共煮沸3次即可。

④將煮好的培養基冷卻至需要的溫度,進行傾注平皿等操作。

 


注意事項

 

1、補水

加熱煮沸的過程,培養基中的部分水分會蒸發掉,造成水分偏少,影響培養基的質量(如平板強度等),導致菌落形態等結果的偏差,因此為了盡量減少誤差,需要在煮沸之前,向搪瓷缸中補加適量培養基配制用水,經驗估計,通常每煮一缸培養基需補加15- 20mL水,實際操作中,需根據各實驗室的具體情況(容器大小及裝量)進行摸索。

2、溶解

所有的培養基,在煮之前必須攪拌至完全溶解,不允許將尚有成團培養基的狀態下,直接進行加熱煮沸,那樣很容易出現滅菌不徹底的現象,尤其是有些含瓊脂的培養基,甚至會有部分瓊脂不能徹底溶解,導致倒出的平皿上有明顯的麩皮狀瓊脂小顆粒,或者有些含有染料的培養基也可能出現染料顆粒,都會影響培養基的使用。

 

3、攪拌

煮沸全程必須持續不斷攪拌,以免糊底。

4、防燙

液面沸騰后,要及時將搪瓷缸從電磁爐上取下,以免液體沸出,造成培養基沾染或燙傷操作人員。